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Bioss讲堂|IHC之石蜡切片16种罕见效果全解析
宣布者:北京yzcbet生物      宣布时间:2018-11-19

本期导读:样本的制备是IHC实验成功的前提条件。样本完成石蜡包埋后,需求成约3-4um的薄片。本文主要引见了切片小技巧及进程中容易出现的16种效果(点击获取全部列表停止了逐一剖析。


切片小技巧

① 组织切片,旧刀修片,新刀切片。

②切片厚度3-4μm(淋巴结、扁桃体、鼻咽、扁桃体2-3μm;脂肪5-6μm)

③切片毛笔应顺着刀背往刀锋扫。

④切片举措轻,用力平均。

⑤室温、冷冻等温度要适宜,易于切出薄片。

⑥刀片尖利,切片角度5°最佳,切片平整无褶皱和收缩。

⑦切片方向:纤维、肌肉走向与切片平行;准绳为软→硬,易→难,主→次。

⑧蜡块外表有钙点,应20%HCL外表泡1-2h,水洗后切。

⑨切片人员应细心操作,防划伤,切后维护保养机器。



展片、捞片、烤片留意事项

?切片光面朝下展片、捞片。

?防止切片被污染。

?摊片水温利于展平又不熔化,必要时用20%酒精摊片。

?用镊子辅佐将组织贴在玻片适宜的位置。

?粗大组织(穿刺、内镜小标本)可以多贴几个。

?玻片洁净,防止脱片(血块、脑组织、脂肪)。

?在烘烤切片前应做好排水,烤片温度高于石蜡熔点5-10℃


切片罕见的16种效果及处置方法

效果1 细胞伸展和收缩;核“起泡”变大损伤;胶原染色嗜碱性

缘由:石蜡温渡过高。

处置方法:烤箱温度高于石蜡熔点5-10℃为佳。


效果2 切片卷成致密团

缘由:①刀钝;②倾斜角太小;③切片太厚。

处置方法:①换新刀片;②假设间隙角充沛,降低倾刀的斜度。


效果3 切片破碎或切不成片

缘由:①组织固定、脱水、透明不彻底,浸蜡不透;浸蜡包埋温渡过高或时间过久。

处置方法:①优化组织处置;②及时改换试剂;③重新脱水弥补;或许重取。


效果4 过火的紧缩

缘由:刀片钝;组织或石蜡过软;用力太猛,速度太快。

处置方法:①换刀片,移刀锋;使组织外表变冷,重新切取;举措轻,用力平均。


效果5 切片不成连片
缘由:刀刃不尖利,刀间隙角度大;蜡块内组织上下端留蜡边太少或不划一,刀边碎片;室温过低或石蜡过硬。

处置方法:移动刀口或改换刀片,反省刀的角度,清洁刀片和刀架反面;在低熔点的石蜡中重新包埋;提高室内温度或暖和蜡块外表(哈气等);切片厚度适宜(依据组织类型)。


效果6 切片易粘附与组织块

缘由:间隙角缺乏;室温过高或包埋石蜡熔点低;刀片、组织块边缘的碎片;组织带静电。

处置方法:添加间隙角;清洁刀边;修剪组织块的边缘;湿润切片机周围的空气,地上洒水,开启加湿器;⑤放置静电防护器或切片机左近放置枯燥板。


效果7 切片条带弯曲不直

缘由:①蜡块上下两面不平行;②蜡块下边与刀口不平行;③切片处刀锋不分歧;④组织自身硬度不分歧。

处置方法:①重新修整蜡块,使上下两边平行;②将蜡块移正,与刀口坚持平行;③移动刀片或改换刀片;④修去组织较软侧的蜡块。


效果8 蜡块组织零落

缘由:①在粗修蜡块时,先放组织后放蜡,否则组织与包埋蜡块黏贴不牢;②蜡块冻时间过长,切片时易出现蜡块零落现象。

处置方法:①包埋先放石蜡后放组织,速度尽能够快;②切片举措小、匀速。


效果9 组织切片不完整,缺损

缘由:①取材时未取中病灶,组织块太大,太厚;②多块组织包埋是陈列不佳;③组织块内组织不平整;④组织包埋方向失误;⑤切片时粗修过多(切削过深)或过少(没切到足够的深度)。

处置方法:①组织太大,脱水 不好,取材厚度3mm为佳;②组织在包埋模中平均铺平;③熟习各种组织的切片特点,防止包埋方向的失误(囊壁、管腔竖直包埋);④切片方向:软到硬,易到难,主到次。


效果10 切片过厚

缘由:①切片机维护不当,切片厚度设置错误;②石蜡太软(熔点低);③石蜡过热;④刀钝。

处置方法:①降低切片厚度设置;②活期校准和保养;③运用适宜组织类型和密度熔点的石蜡;④惯例病理组织切片厚度在3-4μm,淋巴结、脾脏、胸腺、鼻咽组织等含巴细胞成分较多的组织,薄切2-3μm,脂肪5-6μm。


效果11 切片纵裂,损伤,刀痕

缘由:①组织中钙化点、钉、缝合线或纸屑等异物;②刀片缺口;3刀口不洁,含有毛屑、碎组织、皮棉或石蜡等;④石蜡中有杂质。

处置方法:①改换刀片或移动刀口;②运用面脱钙方法(20%HCl);③细心清洁刀刃以除去多余的石蜡堆积;④假设石蜡中有异物,用洁净的石蜡重新包埋。


效果12 切片厚薄不平均/跳刀/百叶窗/搓衣板

缘由:①组织脱水过度;②切片刀不尖利,刀间隙角(或倾斜度)太大;③切片速度太快

④切片机部件松动或磨损;⑤组织致密或坚实;⑥主轴伸出太长。

处置方法:①处置进程中增加脱水时间;②改换刀片,增加倾斜度;③哈气;④均速慢切;⑤确保刀和组织的有关螺丝拧紧夹牢;⑥主轴摇回恢复。


效果13 褶皱/折叠

缘由:①摊片温度不适宜,组织未充沛伸展;②刀片不尖利,刀角度大;③石蜡熔点低,过软或室温较高;④组织缺乏分歧性。

处置方法:①调小刀角度,边切边向蜡块吹气用10-20%酒精摊片,应用浓度差,水的张力来展片;②反省摊片水温,太冷不易展开;太热会发生褶皱或折叠,组织细胞散开;③改换刀片或移动刀口;④切片厚度能否适宜。


效果14 切片裂痕/碎裂

缘由:①组织固定和处置不完全,摊片是发作裂解;②摊片水温过高,摊片时间长招致过度延伸;③摊片时镊子撑开过大;④烤片前切片排水不净。

处置方法:①确保固定和处置完全;②在摊片时悄然延伸蜡带,去除褶皱和折叠;③降低摊片水温(通常低于包埋蜡熔点的5-10℃);④在切片和漂片进程中,小心操作蜡带;⑤在烘烤切片前应很好的排水。


效果15 栅状裂和龟裂

缘由:①固定、透明、浸蜡不充沛;②摊片水温过高;③过度脱水,去除了蛋白质结合的水,组织发脆,当漂浮在水面上是能够会裂开;④切片进程中过度冷冻。

处置方法:①优化组织脱水进程;②降低摊片水温;③切片进程中勿运用冷却喷雾剂,细胞易增加;④匀速慢切,边切边对蜡块吹气。


效果16 切片中有气泡

缘由:捞片时切片下面有气泡。

处置方法:①坚持温水洁净,无杂质;②切片要洁净无污染;③捞片前将组织下的气泡赶走。

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