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Bioss讲堂|HE染色疑问解答
宣布者:北京yzcbet生物      宣布时间:2018-12-10

本期导读:HE染色法是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基本、运用最普遍的技术方法。一张质量上乘的HE切片是病理医生得以做出正确诊断的关键。影响HE染色质量的要素是多方面的。本文主要对HE染色中罕见的几个效果及其对策停止剖析讨论。



苏木精——伊红染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ,简称HE染色法 ,石蜡切片技术里常用的染色法之一 。苏木精染液为碱性 ,主要使细胞核内的染色质与胞质内的核酸着紫蓝色 ;伊红为酸性染料 ,主要使细胞质和细胞外基质中的成分着白色 。


HE染色进程:

?将已入蒸馏水后的切片放入苏木精水溶液中染色数分钟。

?酸水及氨水中分色,各数秒钟。

?流水冲洗1小时后入蒸馏水片刻。

?入70%和90%酒精中脱水各10分钟。

?入酒精伊红染色液染色2—3分钟。

?染色后的切片经纯酒精脱水,再经二甲苯使切片透明。

?将已透明的切片滴上加拿大树胶,盖上盖玻片封固。


HE染色罕见的效果及处置方法

效果1  切片呈雾状/发灰/发白,核染色模糊

缘由:①待封还潮;②苏木素过氧化老化,冰醋酸挥发;③脱水,透明剂不良,杂质过多;

处置方法:空气除湿;②苏木素过滤后参与冰醋酸(促染剂);③惯例改换酒精,二甲苯。


效果2 染色不均

缘由:固定不充沛;②高浓度酒精脱水时间过长;③浸蜡不佳;④染色时间掌握不好;

处置方法:①活期改换染色液;②用2%铁明矾处置;③浸蜡温度高于熔点2℃左右;④苏木素染色镜下控制。


效果3 细胞成分蓝色,如粘液,胶原蛋白或平滑肌

缘由:①苏木素溶液过染;②分化不充沛;③苏木素溶液的PH值>3;

处置方法:①延长染色时间;②用1%盐酸酒精分化2-5s,洗脱过染胞核,不应着色的组织成分;③用乙酸调理苏木素PH值为2.5;④提高酸性酒精的浓度。


效果4 细胞核染色太浅

缘由:①苏木素溶液过老化;②分化时间过长;③苏木素溶液染色时间短;④固定处置不良,组织不易染色;处置方法:①过滤后100ml苏木素+1ml冰醋酸,或改换新颖苏木素溶液;②增加分化时间或稀释分化液;③延伸苏木素染色时间;④高浓度酒精固定时间过长,染不上色,用2%铁明矾处置。


效果5 胞质染色太深

缘由:①切片在伊红溶液中时间过长;②伊红染色后分化缺乏;③伊红染液能够过浓;

处置方法:①增加伊红溶液染色时间,稀释伊红染液;②85%酒精添加分化时间。


效果6 胞质染色太淡

缘由:①伊红染液运用时间太久;②伊红染液的PH值>4.5,乙醇脱水易褪色;③伊红染液后酒精冲洗不正确;④伊红染色时间太短;

处置方法:①改换新颖的伊红染液;②用浓醋酸调理伊红染液PH值(4~4.5),伊红PH值<3.6,核发紫,对比不强;伊红染液PH值>5,染不上;③增加伊红步骤后酒精冲洗的时间;④添加伊红溶液的染色时间。


效果7 细胞核发红棕色

缘由:①苏木素染色液氧化过度;②返蓝缺乏;

处置方法:①及时改换然染液;②返蓝可用流水、温水或稀氨水、0.2%碳酸氢钠等。


举栗


正常染色(细胞核呈蓝色,细胞浆呈玫白色,颜色清楚)(肾)


细胞成分蓝色(胎盘)


切片呈雾状/发灰/发白,核染色模糊(胎盘)


胞质染色太深(肝)


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