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免疫荧光技术指南—冰冻切片制备
宣布者:北京yzcbet生物      宣布时间:2019-6-28

免疫荧光技术简介

      免疫荧光技术是基于荧光基团被特定波长的光激起后发射波长较长的荧光的特性,经过荧光显微镜、激光共聚焦显微镜等仪器的检测,到达定位、示踪、含量测定等目的,并普遍运用于多个研讨范围。荧光染料可以与一抗或二抗直接偶联,也可与链霉素亲和素偶联。主要特点:特异性强,敏感度高,速度快,可停止亚细胞定位的精细观察,可以一次检测多种抗原。

免疫荧光任务原理




样本的制备

      荧光抗体技术主要依托观察切片标本上荧光抗体的染色结果作为抗原的鉴定,因此标本制造的好坏直接影响检测的结果;在制造标本进程中应力图坚持抗原的完整性,并在染色、洗濯和包埋进程中不发作溶解和变性,也不分散至临近细胞或组织间隙中去;标本切片要尽量薄,以利于抗原抗体接触和镜检。


石蜡切片与冰冻切片的对比


冰冻切片制备要点

       冰冻切片由于其可以较好的保管酶功用和抗原性,从而普遍的运用于免疫荧光检测中,并且我们通常会在检测一些翻译后修饰的抗原时运用到它,由于其常采用丙酮停止固定,此类固定剂通常不会掩蔽抗原表位,所以不需求像甲醛固定的石蜡切片必需停止抗原修复,从而减去了冗长的实验步骤,也增加了实验失败的几率。

       冰冻切片的质量与实验成败毫不相关,高质量的切片可以防止实验中组织脱片,增加组织细胞形状的损坏,大大提高了实验结果的可信度。我们要从实验取材末尾就做正确的处置方式,尽量增加人为要素对实验结果形成的不确定性。

1.选取组织
      尽量运用新颖取材的组织,以使抗原较好的保管上去,降低冻存几率从而增加组织内冰晶的发生;离体组织最好直接停止切片,将组织放在样品托上,滴加OCT包埋剂,选择适宜的温度在冰冻切片机中冷冻30min以上,详细时间依据组织大小而定,要保证组织冷冻平均,不宜时间过长。时间过长,组织会因过度冷冻开裂而招致切片失败。
2.制片及罕见效果
     不同组织所需切片温度不同,要选择最适温度才干取得高质量的冰冻切片。冷冻温度通常在-10℃至-25℃左右,所需温度:心、肾、胃、肠<脑、脾、肌肉。
     切片时一定要坚持匀速,切片要平整不能伸展,其厚度通常为7μm。粘片时应平行的将涂有粘片剂的载玻片贴近组织切片,不要从一侧渐渐地将组织切片吸附到载玻片上,这样会影响组织细胞形状。

3.固定及保管

制备好的切片室温放置1 h,晾干后-20℃丙酮中固定20min,切片可以在4℃条件下保管一个月左右,-20℃保管可以适当延伸保管时间;建议尽快运用。

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